關(guān)于醫(yī)學(xué)碩士開題報(bào)告優(yōu)秀范文
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研究課題名稱
硫化氫在大鼠燒傷休克后應(yīng)激反應(yīng)中的作用
一、研 究 內(nèi) 容 和 意 義
探討大鼠重度燒傷休克后氣體信號(hào)分子硫化氫(H2S)血清中的變化對(duì)燒傷休克后早期應(yīng)激反應(yīng)的影響,主要表現(xiàn)為血管活性物質(zhì)(組胺、P物質(zhì))和大鼠心率、血壓的變化,為重度燒傷早期的休克應(yīng)激反應(yīng)引入新的理論機(jī)制,為燒傷后抗休克治療尋找新的研究方向。78只雄性SD大鼠,隨機(jī)分為非燒傷組和燒傷組。燒傷組又分為單純燒傷組、NaHS組、PPG組。燒傷組大鼠制成30%三度燙傷后,在6h、12h、24h、48h、96h各時(shí)項(xiàng)點(diǎn)采集血清。采用敏感硫電極法測(cè)定血清H2S濃度,采用試劑盒分析儀分析血清中血管活性物質(zhì)(組胺、P物質(zhì))變化,采用16道生理指標(biāo)測(cè)量儀測(cè)定大鼠心率、血壓。單純燒傷組血清硫化氫濃度較非燒傷組明顯升高。單純燒傷組、NaHS組、PPG組兩兩比較均有差異。燒傷后大鼠不同時(shí)期血清硫化氫濃度不同。不同硫化氫濃度下血管活性物質(zhì)表達(dá)不同。硫化氫可能參與并抑制燒傷休克后應(yīng)激過程,為重度燒傷后抗休克治療提出新的研究方向。
二 、選題依據(jù)
闡述該選題的研究意義,分析和該研究課題有關(guān)的國內(nèi)外研究概況和發(fā)展趨勢(shì)。
近年來研究發(fā)現(xiàn),生理濃度的硫化氫(hydrogensulfide,H2S)具有多種的生理功能,與氣體分子 NO、CO在部分生物學(xué)功能方面相同或相似,因此它被看作體[1]內(nèi)第三種的氣體信號(hào)分子 ,在多個(gè)系統(tǒng)中具有重要的病理生理學(xué)意義,已成為國內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。研究已發(fā)現(xiàn)它在高血壓、缺氧性肺動(dòng)脈高壓等疾病的發(fā)病過程中具有重要的作用。然而對(duì)疾病情況下的 H2S作用的認(rèn)識(shí)則剛剛起步。本實(shí)驗(yàn)通過外源性H2S干預(yù)燒傷后大鼠,觀測(cè)大鼠重度燒傷休克后早期應(yīng)激反應(yīng)中兩種血管活性物質(zhì)(組胺、P物質(zhì))和大鼠心率、血壓的變化,從而進(jìn)一步了解硫化氫在重度燒傷休克后早期應(yīng)激過程中的作用。
2、國內(nèi)外主要參考文獻(xiàn)(列出作者、論文名稱、期刊名稱、出版年月)
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三 、研究內(nèi)容、創(chuàng)新之處
1、選題的目的、研究內(nèi)容:
硫化氫作為第三種氣體信號(hào)分子應(yīng)用于各領(lǐng)域的多方面研究,并得出可觀的研究成果。氣體信號(hào)分子具有多種病理生理作用。近年來,不少研究人員紛紛開始了氣體信號(hào)分子在燒傷中,尤其重度燒傷后全身應(yīng)激反應(yīng)中作用的'研究。并取得具有一定價(jià)值的研究結(jié)果。目前,氣體信號(hào)分子尤其是硫化氫在燒傷方面的研究尚且不足,有待做出更多的相關(guān)研究。以更多了解硫化氫等在燒傷休克應(yīng)激反應(yīng)中的應(yīng)用價(jià)值。
本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用大面積燒傷大鼠模型 ,通過對(duì)外源性硫化氫干預(yù)重度燒傷大鼠對(duì)血清中血管活性物質(zhì)(組胺、P物質(zhì))表達(dá)的影響和大鼠心率血壓的改變,探討其與燒傷休克后應(yīng)激反應(yīng)的關(guān)系,為臨床嚴(yán)重?zé)齻罂剐菘酥委煂で罂赡苡行У闹委熕幬锾峁⿲?shí)驗(yàn)依據(jù),也為對(duì)硫化氫的進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
2、意義及創(chuàng)新之處:
、攀状窝芯縃2S是否參與了燒傷休克早期應(yīng)激的病理生理過程。
、茷閲(yán)重?zé)齻缙趹?yīng)激過程引入新的理論機(jī)制,為燒傷抗休克治療尋找新的研究方向。
、茄芯繜齻菘撕笱逯醒芑钚晕镔|(zhì)(組胺、P物質(zhì))表達(dá)的變化規(guī)律。
3、應(yīng)用前景:
第三種內(nèi)源性氣體信號(hào)分子H2S 越來越受到人們的廣泛關(guān)注和重視,成為當(dāng)前生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱門課題。H2S 具有多種生物學(xué)效應(yīng), 在全身多系統(tǒng)中參與了許多方面的生理及病理生理過程,揭示了某些疾病未知的發(fā)病機(jī)理,并提出了新的治療途徑,具有廣闊的研究前景和應(yīng)用價(jià)值。目前對(duì)H2S在心血管循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)及消化系統(tǒng)等的研究已有很大的成果,但在大面積嚴(yán)重?zé)齻∪伺K器保護(hù)及與全身炎癥反應(yīng)綜合征方面的研究相對(duì)缺乏。 本實(shí)驗(yàn)旨在探討H2S對(duì)嚴(yán)重?zé)齻笤缙趹?yīng)激反應(yīng)的抗休克作用,從而為臨床重度燒傷患者的疾病演變和治療提供一條新的思路。
四 、課題設(shè)計(jì)方案
包括研究工作的主要技術(shù)路線、實(shí)驗(yàn)方法或資料收集方法、統(tǒng)計(jì)處理的方法等:
1.主要技術(shù)路線
2.試驗(yàn)方法
1)動(dòng)物模型制備及分組
78只健康雄性 SD大鼠,體重 200~240 g,購于青海省地方病疾病控制中心。在大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為非燒傷組和燒傷組。燒傷組又分為單純燒傷組、NaHS干預(yù)組、PPG干預(yù)組。分別設(shè)6h、12h、24h、48h組各6只,燒傷組大鼠背部脫毛并烏拉坦麻醉后,仰臥固定在燒傷模型板上,將背部裸露皮膚浸泡在95°C恒溫水箱中20秒,制成30%三度燙傷后,立即用紗布拭干水漬,腹腔注射生理鹽水40 mL/kg抗休克,自由進(jìn)食水。NaHS干預(yù)組補(bǔ)液復(fù)蘇后腹腔注射硫氫化氫2ml,PPG干預(yù)組復(fù)蘇后腹腔注射PPG2ml。正常對(duì)照組大鼠予以背部剃毛及麻醉后浸入 37 cC水浴中假燙 20 S,假燙后不給復(fù)蘇補(bǔ)液 。單純燒傷組背部剃毛及麻醉后浸入95 cC水浴中燙 20 S,燙后復(fù)蘇補(bǔ)液,不給任何干預(yù)。
2)大鼠血壓、心率的測(cè)定。
各組大鼠均在6 h、12 h、24 h、48 h、96 h各時(shí)相點(diǎn)內(nèi)分別隨機(jī)選取對(duì)應(yīng)大鼠,烏拉坦(100 mg/kg)麻醉下 ,用16道生理測(cè)量儀,在頸部頸動(dòng)脈插管下測(cè)定大鼠心率、血壓。
3)血標(biāo)本的采集和處理。
各組大鼠均于取血前 12 h禁食,于6 h、12 h、24 h、48 h、96 h各時(shí)相點(diǎn)內(nèi)分別隨機(jī)選取對(duì)應(yīng)大鼠,烏拉坦(100 mg/kg)麻醉下 ,剖腹 ,直視下腹主動(dòng)脈采血 ,每只大 鼠抽血 2 mL,室溫 下靜置約 20 min后 ,2000轉(zhuǎn)離心 10 分鐘,分離出血清 ,置于 一70℃冰箱中冰凍保存,待測(cè)。
4)血清硫化氫及各血管活性物質(zhì)的含量測(cè)定
血清中血管活性物質(zhì)(組胺、P物質(zhì))的含量測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法 ,硫化氫采用比色法測(cè)定,操作均按照說明書進(jìn)行。分別記錄每時(shí)相點(diǎn)檢測(cè)血清中各個(gè)因子含量 ,比較 各組大 鼠血 清 中硫化氫及C-反應(yīng)蛋白、IL-6、總體抗氧化能力的含量變化。
3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法
采用 SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料用例數(shù)及百分?jǐn)?shù)表示,計(jì)量資料以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差( ±s)表示。率的比較采用卡方檢驗(yàn);不同時(shí)相點(diǎn)下各組間均數(shù)比較采用方差分析,兩組間均數(shù)的比較采用 LSD檢驗(yàn);同一時(shí)相點(diǎn)兩組間比較采用 t 檢驗(yàn) 。以 P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義標(biāo)準(zhǔn)。
五、實(shí)施計(jì)劃進(jìn)度
2010.9---2010.10 文獻(xiàn)資料的檢索、課題預(yù)調(diào)查、撰寫綜述。
2010.10---2010.11 藥物置備、動(dòng)物購買、預(yù)實(shí)驗(yàn)及撰寫開題報(bào)告。
2010.11---2010.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。
2011. 1--2010.2 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)及數(shù)據(jù)整理統(tǒng)計(jì)、撰寫論文。
六、預(yù)期研究成果
預(yù)期結(jié)果及其意義:
通過對(duì)大鼠燒傷后給予外源性氣體信號(hào)分子硫化氫(H2S)前后血清血管活性物質(zhì)(組胺、P物質(zhì))和大鼠心率、血壓動(dòng)態(tài)變化的對(duì)比,表明H2S參與了燒傷休克早期應(yīng)激的病理生理過程,并有一定的抗休克作用。為嚴(yán)重?zé)齻缙谛菘说牟±砩碜兓胄碌睦碚摍C(jī)制,為燒傷抗炎治療尋找新的研究方向。
七、估算課題工作量、完成課題的條件
1、儀器設(shè)備、人員配備、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、藥物試劑等:
(1)儀器設(shè)備:
95℃恒溫水浴箱;
高轉(zhuǎn)速離心機(jī);
16道生理指標(biāo)測(cè)量儀;
敏感硫電極;
722光柵分光光度計(jì);
酶標(biāo)儀。
(2)人員配置:
符合條件的實(shí)驗(yàn)室及相關(guān)技術(shù)人員的指導(dǎo)和協(xié)助。
(3)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
健康雄性SD大鼠78只,體重200~250 g,青海省地方病疾病控制中心選購。
(4)藥物試劑
硫氫化鈉(NaHS)注射液;LD-炔丙基甘氨酸(PPG)注射液;烏拉坦麻醉劑;大鼠組胺(HIS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒;大鼠P物質(zhì)(SP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒;抗壞血酸(C6H8O6);氫氧化鈉(NAOH);乙二胺四乙酸二鈉(EDTA);Na2S•9H2O;L-半胱氨酸;5’-磷酸吡哆醛;磷酸二氫鉀;磷酸氫二鉀;三氯乙酸;三氯化鐵;醋酸鋅;對(duì)氨基二甲基對(duì)苯二胺鹽酸鹽
2、開展科學(xué)研究的經(jīng)費(fèi)
項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)支出(元)備 注(依據(jù)與說明)
一、研究經(jīng)費(fèi)
1、科研業(yè)務(wù)費(fèi)
(1)測(cè)試/計(jì)算/分析費(fèi)
(2)能源/動(dòng)力費(fèi)1000
(3)會(huì)議/差旅費(fèi)
2、實(shí)驗(yàn)材料費(fèi)
(1)原材料/試劑/分析費(fèi)2650兩個(gè)個(gè)試劑盒2200元;麻醉劑450元
(2)其他4160實(shí)驗(yàn)大鼠、籠具及飼料
3、儀器設(shè)備
(1)購置
(2)試劑
4、實(shí)驗(yàn)室改裝費(fèi)
二、勞務(wù)費(fèi)
三、合計(jì)8310
說明
八、存在的問題及解決的辦法措施
1、 預(yù)計(jì)研究過程中可能遇到的困難和問題:
1)研究經(jīng)費(fèi)不足;
2)試劑質(zhì)量問題;
2)缺少相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備;
3)專業(yè)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)不足;
4)動(dòng)物飼養(yǎng)過程及實(shí)驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)的誤差;
5)不可預(yù)知的問題。
2、解決的辦法和措施:
1)盡量節(jié)省開支及向?qū)熒暾?qǐng)資金。
2)嚴(yán)格按照動(dòng)物飼養(yǎng)要求,每組多預(yù)備一只。
3)操作過程力求規(guī)范,檢測(cè)設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控,盡量選同一批號(hào)的試劑,藥物。
4)完善實(shí)驗(yàn)前期的準(zhǔn)備工作,參閱相關(guān)文獻(xiàn)資料,找到相關(guān)的理論依據(jù)。
5)嚴(yán)格按照文獻(xiàn)記載造模并進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn);力爭掌握成熟的實(shí)驗(yàn)操作方法,并可尋求有經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員的指導(dǎo)。
6)向公衛(wèi)系及高原實(shí)驗(yàn)中心尋借儀器。
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